目前提取植物提取物常用的方法有溶劑提取法、超聲波提取法、微波提取法和酶提取法,而超臨界流體萃取法、微波輔助提取法等則作為新的提取技術(shù)被廣泛使用。
溶劑提取法
溶劑提取法是用溶劑從固體原料中提取有效成分,所用的溶劑必須具備與所提取的溶質(zhì)互溶的特性。將植物材料粉碎后,放入適合的容器內(nèi),加入數(shù)倍量溶劑,可采用浸漬、滲漉、煎煮、回流和連續(xù)提取法進(jìn)行提取。
在溶劑提取法的提取工藝過程中,溶劑的濃度、料液比、提取溫度、提取的時(shí)間會(huì)直接影響有效成分的提取率。Ye qing等人通過溶劑萃取法提取大米中的赭曲霉素A,用熒光探測(cè)法和液相色譜法確定OTA的含量,研究表明在最適宜的料液比、提取溫度和提取時(shí)間的情況下,提取物OTA含量最高為4.17ng/g。Monte D. Holt等采用溶劑萃取法從生的和熟的小麥種提取烷基間苯二酚,實(shí)驗(yàn)表明采用溶劑萃取法能夠節(jié)約提取時(shí)間。
超聲波提取法
超聲波提取是利用超聲波產(chǎn)生的強(qiáng)烈振動(dòng)和空化效應(yīng)加速植物細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的釋放、擴(kuò)散并溶解進(jìn)入溶劑中,同時(shí)可以保持被提取物質(zhì)的結(jié)構(gòu)和生物活性不發(fā)生變化。超聲波提取原理主要為物理過程,是近年來逐漸受到重視的一個(gè)較新的提取方法。對(duì)多數(shù)成分來說,超聲波提取方法較常規(guī)的溶劑提取能大幅地縮短提取時(shí)問,消耗溶劑少,浸出率高,因此具有較高的提取效率。
在超聲波法提取工藝過程中,溶劑的選擇和濃度、料液比、提取溫度、提取的時(shí)間會(huì)直接影響提取率。Yang shou shi等人利用超聲波提取法提取五味子,主要研究了超聲提取率的影響因素,實(shí)驗(yàn)研究得出,提取率隨著溫度的升高而升高,隨著功率的增大而增大。Ye qing等利用超聲波提取櫻桃中的維生素E和酚類化合物,主要比較了超聲提取法和酶提取法在提取時(shí)間、提取率上的差異,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明超聲波提取法時(shí)間上比酶提取縮短了6倍,超聲波提取的提取率是酶提取的2~3倍。鐘愛國(guó)等利用超聲波萃取鮮竹葉中葉綠素的方法,用分光光度計(jì)來定量測(cè)定所萃取的葉綠素的含量。結(jié)果表明:與常用的有機(jī)溶劑提取法相比,超聲波萃取法不僅萃取率高、速度快、效率高,而且是室溫提取,無需加熱,節(jié)約能源。
超臨界流體萃取法
超臨界流體提取(supercriticalfluid extraction,SFE)是一種較新型的提取分離技術(shù),一般采用CO2作為提取劑。超臨界流體萃取法的原理是利用超臨界流體的獨(dú)特溶解能力和物質(zhì)在超臨界流體中的溶解度對(duì)壓力溫度的變化非常敏感的特性,通過升溫降壓手段(或兩者兼用)將超臨界流體中所溶解的物質(zhì)分離出來,達(dá)到分離提純的目的,它兼有精餾和提取兩種作用,具有活性成分不易失活、產(chǎn)品質(zhì)量高、提取分離過程同步完成等優(yōu)點(diǎn),被認(rèn)為是綠色環(huán)保的高新分離技術(shù),特別適合于不穩(wěn)定天然產(chǎn)物和生理活性物質(zhì)的分離與精制。
20世紀(jì)80年代中期,超臨界CO2提取技術(shù)逐步應(yīng)用于植物活性成分的提取分離中,是研究和應(yīng)用較為成功的一項(xiàng)新技術(shù)。Ruey Chi Hsu等以CO2和乙醇為溶劑,采用超臨界流體提取技術(shù)提取靈芝的有效成分,研究結(jié)果表明:超臨界流體提取法保證了靈芝提取物的流動(dòng)性且不受溫度的影響。Monica Waldeb.ck等采用加壓流體萃取技術(shù)提取橄欖中的角鯊烯和α-生育酚兩種成分,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:溶劑為乙醇、提取溫度為190℃、提取時(shí)間為10min時(shí),提取效果最好。YI QI ANG GE等采用超臨界CO2提取技術(shù)從小麥胚芽中提取天然維生素E,主要研究了提取前處理和提取工藝條件對(duì)產(chǎn)率的影響,實(shí)驗(yàn)研究表明:當(dāng)粒子為30網(wǎng)、壓力為4000~5000psi、提取溫度為40~50℃、CO2流體流速為2.0mL/min時(shí)提取率最高。
微波輔助提取法
微波輔助提取技術(shù)(microwave.assistedextraction,MAE)是利用微波能提高提取效率的一種新技術(shù)。微波輔助提取就是利用微波加熱的特性對(duì)物料中目標(biāo)成分進(jìn)行選擇性提取的方法,通過調(diào)節(jié)微波的參數(shù),可有效加熱目標(biāo)成分,以利于目標(biāo)成分的提取與分離。微波輔助提取法提取植物的原理是植物樣品在微波場(chǎng)中吸收大量的能量,而周圍的溶劑則吸收較少,從而在細(xì)胞內(nèi)部產(chǎn)生熱應(yīng)力,植物細(xì)胞因內(nèi)部產(chǎn)生的熱應(yīng)力而破裂,使細(xì)胞內(nèi)部的物質(zhì)直接與相對(duì)冷的提取溶劑接觸,進(jìn)而加速了目標(biāo)產(chǎn)物由細(xì)胞內(nèi)部轉(zhuǎn)移到提取溶劑中,從而強(qiáng)化了提取過程。微波輔助提取法技術(shù)原理上與浸泡和過濾一樣也使用熱能,但是提取植物提取物的速度卻要比傳統(tǒng)的方法快得多,在減少提取時(shí)間的同時(shí)避免有價(jià)值的植物提取物被破壞和降解。
目前,微波輔助提取法以其快速的提取速度和較好的提取物質(zhì)量成為天然植物活性成分提取的有力工具,但微波輔助提取法是選擇性內(nèi)加熱且要求被處理的物料具有良好的吸水性,換言之待分離的產(chǎn)物所處的位置容易吸水,否則細(xì)胞難以吸收足夠的微波將自身擊破,產(chǎn)物也就難以迅速釋放出來。對(duì)于液體提取體系,要求溶劑物質(zhì)具有極性,非極性溶劑對(duì)微波的作用不敏感。Yang shou shi等采用微波輔助提取法提取藥用植物中提取的黃酮類和香豆素類化合物,通過正交實(shí)驗(yàn)研究樣品大小、料液比、提取溫度和時(shí)間對(duì)提取率的影響,實(shí)驗(yàn)研究表明:在最佳提取工藝條件下提取率為98.85%。Yang shou shi等用微波輔助提取法提取干羅漢果中的羅漢果皂苷,結(jié)果顯示微波輔助提取法的提取率為70.6%,比常規(guī)水提取法高45%,時(shí)間上也縮短了50%。
微波超聲波協(xié)同提取法
微波是一種非電離的電磁輻射,被輻射物質(zhì)的極性分子在微波電磁場(chǎng)中快速轉(zhuǎn)向及定向排列,從而產(chǎn)生撕裂和相互摩擦引起發(fā)熱,這可以保證能量的快速傳遞和充分利用,具有高效節(jié)能無工業(yè)污染等優(yōu)點(diǎn),但微波的穿透深度有限(與其波長(zhǎng)在同一數(shù)量級(jí)),且它在強(qiáng)化提取過程中傳質(zhì)功能并不顯著。超聲波是一種高頻機(jī)械波,具有湍動(dòng)效應(yīng)微擾效應(yīng)界面效應(yīng)和聚能效應(yīng)等,但超聲波所產(chǎn)生的熱效應(yīng)不顯著,且局限在空化泡周圍的極小范圍。將它們兩者結(jié)合起來,協(xié)同作用有利于破壁組分釋放等,即通過微波-超聲波協(xié)同強(qiáng)化提取技術(shù)可獲取一種高效價(jià)廉無污染的生物活性物質(zhì)的提取方法。HeJT等采用微波-超聲場(chǎng)協(xié)同從中藥中提取水溶性生物活性成分,均取得較好的效果。羅鋒等采用微波超聲波協(xié)同提取法從甘草中提取黃酮。馬利華等研究了傳統(tǒng)蒸餾法與微波超聲波協(xié)同提取法對(duì)牛蒡中類胡蘿卜素提取率的影響,并通過正交實(shí)驗(yàn)確定最佳提取條件。白紅進(jìn)等分別以無水乙醇蒸餾水及無水乙醇-蒸餾水(體積比為1∶1)等為溶劑,采用微波超聲波協(xié)同提取蘆薈,并采用食用油氧化穩(wěn)定性測(cè)定儀分別測(cè)定提取物對(duì)菜籽油豬油棉籽油及葵花油的抗氧化作用。
酶提取法
天然植物的細(xì)胞壁由纖維素構(gòu)成,其中植物的有效成分往往被包裹在細(xì)胞壁內(nèi)。酶提取法就是利用纖維素酶果膠酶蛋白酶等(主要是纖維素酶),破壞植物的細(xì)胞壁,以促使植物有效成分最大限度溶解分離出的一種方法。在酶提取法的提取工藝中,酶的選擇、酶濃度、pH值、酶解溫度、酶解時(shí)間都會(huì)影響植物提取物的提取率。
E. BARZANA等人采用酶提取法從萬壽菊提取類胡蘿卜素,主要研究了料液比、酶濃度、酶解時(shí)間和溫度等對(duì)提取率的影響,研究結(jié)果表明最佳提取工藝為:料液比1∶4、酶濃度0.3%、提取時(shí)間為1.5h、溫度為25℃。科研同事成員等人采用酶提取法提取銀杏中的活性成分—黃酮,并通過正交實(shí)驗(yàn)找出酶濃度、pH值、酶解溫度和時(shí)間等影響提取率的最佳工藝條件。